рабочая тетрадь по токсикологии 90 %

ОБЩАЯ ТОКСИКОЛОГИЯ

ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ.

ЦЕЛЬ, ЗАДАЧИ И ПОРЯДОК ПРОВЕДЕНИЯ ОТБОРА ПРОБ.

Вопросы для самостоятельной подготовки:

Цели и задачи ХТА.

Правила отбора, упаковки, пересылки проб корма и патологического материала для ХТА.

Сопроводительная информация для ХТА.

Химикотоксикологический анализ (ХТА) – это комплексное исследование патологического материала на присутствие в нем ядовитых веществ. В качестве патологического материала рассматриваются объекты среды обитания животного (корм, вода, воздух, почва и др.), а также ткани животного, пострадавшего от отравления.

Целью ХТА является качественное и количественное обнаружение ядовитого вещества в патологическом материале, выявление причины отравления.

Задачи ХТА

1.Постановка диагноза при отравлениях.

2.Рекомендации о пригодности кормов и продуктов питания животного происхождения (мясо, яйца, молоко).

Этапы диагностики отравления.

Диагноз на отравление ставиться комплексно с учетом:

1.Анамнеза отравления;

2.Анализа симптомов отравления;

3.Результатов ХТА;

4.Результатов вскрытия.

ПРАВИЛА ОТБОРА, УПАКОВКИ И ПЕРЕСЫЛКИ МАТЕРИАЛА ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА (ХТА).

Химико-токсикологические исследования играют огромную роль при санитарно-гигиенической оценке кормов и продуктов животноводства. Только на основе этих исследований можно сделать заключение о соответствии кормов и продуктов животноводства необходимым стандартам.

Этапы проведения химико-токсикологических исследований.

Отбор проб для исследования.

Извлечение токсических веществ из исследуемого материала.

Очистка извлечений (экстрактов) от сопутствующих веществ, мешающих идентификации ядов.

Идентификация ядовитых веществ с помощью качественных и количественных методов.

Объекты химико-токсикологического анализа.

В качестве объектов для химико-токсикологической экспертизы могут быть использованы различные биологические субстраты: кровь, моча, рвотные массы, экскременты, внутренние органы трупов животных, остатки пищевых продуктов и кормов, лекарственные средства, пестициды, вода, объекты животноводческих помещений, земля.

Порядок отбора проб и материала, упаковки и посылки на исследование.

Достоверность химико-токсикологического анализа во многом зависит от точности соблюдения правил отбора проб, их консервирования, упаковки, отправки, хранения, последовательности и тщательности исследований. Отбор проб всегда производится по определённым правилам, которые закреплены в ряде государственных стандартов (ГОСТ), методических указаний и рекомендаций.

Для характеристики отбираемых образцов исследуемой продукции принято использовать следующие термины:

Выемка – небольшое количество продукта (зерно, корнеплоды и т.д.), отобранного из партии за 1 приём из 1 точки.

Выборка – определённое количество штучной продукции, отбираемое за 1 приём от каждой единицы упаковки для составления исходного образца.

Исходный образец – совокупность всех выборок (выемок), отобранных из партии.

Разовая проба –проба, отобранная из каждой единицы упаковки или единицы продукции (в том числе туши животного).

Общая проба совокупность разовых проб.

Средняя проба – общая проба после тщательного перемешивания разовых проб.

Средний образец – часть исходного образца или средней пробы, выделенная для анализа. Для небольших партий продукта средняя проба одновременно является и средним образцом.

Навеска – точно отвешенная часть среднего образца, выделенная для анализа.

Способ отбора проб зависит от характера объекта (поле, склад), формы материала, от которого берётся проба: сыпучий, штучный, соломоподобный, назначения пробы.

Размер исходного образца различных кормовых средств растительного происхождения, в зависимости от величины партии, находится в пределах от 1 до 5 кг (средний образец от 0,25 до 1 кг), продукты животного происхождения – исходный образец от 0,2 до 0,5кг, молоко – 0,5 л. Средний образец для этих видов продукции соответствует по всей массе исходному образцу.

Жидкие и полужидкие продукты помещают в чистую стеклянную посуду, закрывающуюся стеклянными или полиэтиленовыми пробками. Мясо и мясопродукты заворачивают в пергаментную бумагу, а затем в бумажный пакет или полиэтиленовый мешочек. Образцы в мелкой расфасовке направляют в лабораторию в оригинальной упаковке.

При подозрении на отравление в лабораторию направляют материал от трупов павших или вынужденно убитых животных и пробы всех кормов (по 1 кг каждого вида корма), которые скармливали животным в этот период, с целью установления источника интоксикации. Обязательно посылают остатки кормов из кормушек, которыми пользовались больные и павшие животные.

От трупов животных для химического исследования в лабораторию посылают в отдельных упаковках следующий материал:

-часть пищевода и поражённую часть желудка с содержимым в количестве 0,5 кг, а от крупного и мелкого рогатого, скота и верблюдов — часть пищевода и сычуга и небольшое количество содержимого из разных мест сычуга и рубца. Желудок и его cодержимое берут следующим образом: после вскрытия трупа и внешнего осмотра внутренних органов перевязывают пищевод и двенадцатипёрстную кишку вблизи стенки желудка (две перевязки в каждом месте) и перерезают ткань между лигатурами. Желудок извлекают на чистую поверхность (большая стеклянная или эмалированная посуда и т. п.) и вскрывают его по передней стенке. Содержимое желудка вначале тщательно перемешивают, не извлекая из органа, после чего осторожно, чтобы не загрязнить, берут среднюю пробу его. Для перемешивания нельзя использовать металлические предметы;

— отрезок тонкого кишечника длиной до 0,5 м из наиболее поражённой части вместе с содержимым до 0,5 кг, предварительно перевязав отрезок кишки с двух концов;

— отрезок толстого кишечника длиной до 40 см с содержимым до 0,5 кг, также перевязав его с обоих концов;

— часть печени массой 0,5—1,0 кг вместе с жёлчным пузырем (от крупных животных), от мелких животных печень берут целиком;

— одну почку;

- мочу в количестве 0,5. л из мочевого пузыря;

- скелетные мышцы массой 0,5 кг;

- остальные паренхиматозные органы от 300 до 500 г.

При подозрении на отравление газами (синильной кислотой, сероуглеродом и др.) дополнительно берут наиболее полнокровную часть лёгкого в количестве 0,5 кг, трахею, часть сердца, 200 мл крови, часть селезёнки и головного мозга.

От мелких животных и птиц органы берут целиком или направляют несколько трупов, чтобы получить достаточную массу объектов для химических реакций.

При вскрытии извлечённого из земли трупа животного (например — при повторных экспертизах) надо взять: сохранившиеся внутренние органы и мышцы в количестве до 1 кг каждого объекта и обязательно землю под трупом 0,5 кг в двух-трёх местах.

При подозрении на отравление пестицидами, минеральными удобрениями, химическими веществами, употребляемыми в строительстве, и другими химикатами, посылают одновременно пробы их от 100. до 1000 г.

От животных в период переболевания при подозрении на отравление для химического анализа берут рвотные массы, желательно первые порции; мочу — все количество, которое удалось получить; каловые массы до 0,5 кг; содержимое желудка, полученное путём зондирования. От лактирующих животных можно направлять на анализ молоко, от кур — яйца. В некоторых случаях для прижизненной диагностики берут кровь, волосы и шерсть (на ртуть, некоторые хлорорганические вещества).

При подозрении на проникновение яда через кожу (инъекция, укус и т. д.) обязательно берут часть кожи вместе с подкожной клетчаткой и мышцами там, где предполагается место поступления вещества.

- Если подозревают отравление «следствие поедания ядовитых растений или растений, в которых накопились сильнодействующие вещества при использовании удобрений и т. п., берут — для ботанического и химического анализа пробы растений в следующем порядке: деревянную рамку площадью 1 м2 накладывают па травостой луга или пастбища, и все растения внутри рамки срезают под корень или собирают их целиком с корневой системой. Если травостой однотипный, то пробы берутв 3-5 местах с одного гектара луга или пастбища, на котором находились животные. При разнотипномтравостое количество проб необходимо увеличить с целью большего охвата растительности. Если растения можно доставить в лабораторию в течение нескольких часов, их посылают в сыром виде; при длительной доставке проб травы сушат и пересылают в сухом виде.

Подготовленные пробы надо поместить в стеклянную банку с притертой пробкой или новый полиэтиленовый мешочек, плотно закупорить, опечатать сургучной печатью или опломбировать.

На каждую банку или упаковку наклеивают этикетку с указанием вида материала или пробы, вида и кличка животного, даты падежа и вскрытия, Ф.И.О. владельца животного. Одновременно с этим составляется сопроводительная. В виде приложения в лабораторию направляется выписка из истории болезни, протокола вскрытия, акта обследования хозяйства, предполагаемой причины заболевания (падежа).

Патологический материал направляется в лабораторию в опечатанном виде с нарочным.

При обнаружении остатков токсических веществ в повышенном количестве образцы сохраняются до принятия соответствующих мер. Из лаборатории образцы могут выдаваться только по требованию следственных органов.

Составные сопроводительной:

Название хозяйства (владельца), его адрес, телефон и банковские реквизиты.

Основные сведения о хозяйстве (направление, количество животных, уровень продуктивности.

Сведения о кормлении, условиях содержания, общая оценка ветеринарно-санитарного состояния фермы.

Общая характеристика эпизоотической обстановки в хозяйстве с указанием уровня заболеваемости и смертности.

Общие сведения о лечебно-профилактических мероприятиях и их основные результаты.

Вид, возраст павшего животного, описание клинической картины заболевания.

Результаты патологоанатомического вскрытия с указанием патологоанатомического диагноза.

Предполагаемая причина падежа.

Описание материала, направленного на исследование.

Заявляемое направление исследований с точным указанием токсических веществ, которые необходимо определить в направляемом материале.

Дополнительные сведения (дата отбора материала, условия хранения до отправки, с кем отправляется материал).

Подпись врача ветеринарной медицины.

Оплата гарантируется (адрес и реквизиты юридического лица, гарантирующего оплату проводимых исследований).

Подпись лица, гарантирующего оплату.

Дата.

Приложение 1.

Направление в лабораторию ветеринарной медицины: _____________________________

СОПРОВОДИТЕЛЬНАЯ

к материалу, направленному в лабораторию для исследований.

____________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

_______________________________ ____________________

_______________________________

_______________________________

_______________________________

_______________________________

_______________________________ _____________________

__________________________________________________________________________________________________________ _____________________

«______»__________________ 2010г.

МЕТОДЫ АНАЛИЗА ЯДОВИТЫХ ВЕЩЕСТВ.

Вопросы для самостоятельной подготовки:

Первичная обработка патологического материала в токсикологической лаборатории.

Способы выделения ядовитыхвеществ из биологического материала.

Способы очистки экстрактов и подготовки их к идентификации токсических веществ.

Первичная обработка патологического материала в токсикологической лаборатории.

В лаборатории поступивший патологический материал разделяют на три части. Первая часть используется для основного анализа; вторая часть для дополнительного исследования; третья часть опечатывается и оставляется на хранение. Эта часть служит для контроля.

ХТА начинают с определения того токсического вещества, которое подозревается в качестве причины отравления (что указано в сопроводительной информации).

При острых отравлениях в первую очередь исследуют содержимое желудочно-кишечного тракта, при хронических отравлениях — паренхиматозные органы.

Способы выделения ядовитых веществ из биологического материала:

Изолирование дистилляцией с водяным паром (спирты, альдегиды, летучие соединения, синильная кислота, летучие жирные кислоты, молочная кислота, сероуглерод, органические растворители, нитропроизводные, фенолы и др.).

Изолирование подкисленным 96° или 70° этиловым спиртом (алкалоиды, гликозиды, ряд синтетических веществ, пестициды и др.).

Изолирование подкисленной водой (алкалоиды, некоторые лекарственные препараты др.).

Изолирование подщелоченной водой (некоторые органические кислоты, вещества фенольного характера).

Изолирование органическими растворителями (пестициды и др. соединения).

Минерализация(соединения мышьяка и металлов).

Диализ (кислоты, щелочи, некоторые соли).

1. Изолирование токсических веществ дистилляцией с водяным паром

- применяется в лабораториях и в химической промышленности дляполучения веществ в чистом виде. В токсикологической химии дистилляцией с водяным паром извлекаются лекарственные и сильнодействующие вещества из различных биологических объектов и патологического материала.Отгонка водяным паромпроводится для извлечения легколетучих химических соединений (цианидов, формальдегида, фенола, ФОС, ХОС).

Дистилляция с водяным паром проводится в специальном приборе. Навеску измельченного патологического материала поместить в стеклянную колбу, через которую пропустить водяной пар с последующим его охлаждением. В дистилляте определяют ядовитые вещества.

2. Изолирование токсических веществ подкисленным спиртом.

С помощью этого способа можно выделять многие органические вещества различной химической природы (кислоты и их производные, лактоны, многоатомные фенолы, полинитросоединения, производные анилина и парааминофенола, алкалоиды, синтетические лекарственные вещества основного характера).

Современный вариант метода извлечения токсических веществ подкисленным спиртом базируется на следующих основных моментах.

Исследуемый объект (50-100 г) помещают в колбу и заливают 96° этиловым спиртом. Спирт должен полностью покрывать исследуемый объект. Затем содержимое подкисляют 10% спиртовым раствором виннокаменной, щавелевой или уксусной кислот. Кислоту вносят дробно, перемешивая содержимое и контролируя реакцию среды индикаторной бумагой. Величина РН среды в конечном результате должна составлять 2,5-6,0. Экстракцию в колбе проводят в течение 12-24 часов. Затем жидкость декантируют, а остаток заливают новой порцией этилового спирта. Содержимое вновь подкисляют до рН 2,0-3,0. Операцию извлечения проводят 2-4 раза. Для ускорения извлечения ядов используют аппарат для встряхивания. Срок извлечения яда при этом удается сократить в несколько раз. Можно считать, что экстракция на аппарате для встряхивания в течение 1-2 часов заменяет экстракцию в покое в течение 10-12 часов.

3.Изолирование токсических веществ путём минерализации органического материала

Этот способ используют при определении тяжелых металлов, а также мышьяка, сурьмы и фтора.

Минерализация — окисление (сжигание) органического вещества, составляющего объект исследования, и предпринимаетсядляосвобождения неорганических соединений из их комплексов с белками. В результате минерализации сложные соединения металлов с белками разрушаются, образуя более простые и менее прочные комплексы, способные при дальнейшем химическом исследовании разлагаться.

Наиболее широко распространенные методы минерализации можно разделить на две большее группы: минерализация путем простого сжигания (сухое озоление) и минерализация окислением с помощью различных реагентов в присутствии кислот (влажная минерализация).

Техника минерализации. Подготовленный для минерализации материал помешают в колбу Кьельдаля на 500-800 мл и заливают смесью равных объёмовдистиллированнойводы, концентрированной серной и азотной кислот (75 мл смеси вводят для обработки 100 г биологического материала). Колбу закрепляют в штативе в вертикальном положении так, чтобы дно ее находилось на расстоянии 1-2 см от асбестовой сетки. Над колбой укрепляют делительную воронку со смесью разведенной азотной кислоты (1:1). Когда прибор закреплен, начинают осторожно нагревать колбу.

В процессе разрушения органических веществ обычно наблюдается две стадии. Прежде всегопроисходит разрушение форменных элементов и деструкция тканей. Эта стадия длится 15-45 минут.

Разрушение серной и азотной кислотой считается законченным при таком состоянии минерализата, когда бесцветная жидкость при нагревании её без добавления азотной кислоты до стадии обильного выделения белых паров серной кислоты не темнеет. После охлаждения минерализат обычно бесцветен или слегка желтый и прозрачен. В присутствии ионов меди и хрома минерализат может быть окрашен, а при содержании бария и свинца, после добавления воды, содержать осадок.

4. Изолирование токсических веществ из биологического материала диализом.

Диализ - метод удаления низкомолекулярных неэлектролитов и электролитов из коллоидных растворов высокомолекулярных веществ, основанный на свойствах некоторых мембран пропускать молекулы и ионы, задерживая, коллоидные частицы и макромолекулы.

В ветеринарной практике диализ наиболее широко используют для определения нитратов и нитритов в различных биологических объектах.

Исследуемый объект при этом смешивается с водой до образования густой кашицы, способной фильтроваться. Смесь через 1-2 часа фильтруют. Диализ проводят 2-3 раза по 4-6 часов. Слитые вместе диализаты упаривают на водяной бане до небольшого объема и исследуют одним из подходящих для конкретной задачи способов.

Жидкость, подвергаемую диализу, отделяют от чистого растворителя соответствующей мембраной, через которую молекулы и ионы диффундируют в растворитель и, при достаточно частой смене растворителя, почти целиком удаляются из диализируемой жидкости.

Способы очистки экстрактов и подготовки их к идентификации токсических веществ.

Экстракция и реэкстракция.

Вымораживание.

Осаждение.

Хроматографическая очистка.

В большинстве методик используется комбинация нескольких способов очистки экстрактов, т. к. ни один из указанных методов не дает возможности получить достаточно очищенныйэкстракт, пригодный для идентификации яда большинством известных способов.

Очистка путём экстракции и реэкстракиии.

Экстракция - процесс переноса растворенного вещества из одной жидкой фазы в другую (несмешивающуюся с ней).

Экстрагент - жидкая фаза (органический растворитель, смесь растворителей или раствор экстрагирующего реагента), которую используют для экстракции (извлечения) вещества из другой фазы.

Экстракты - отделенная фаза (обычно органическая), содержащаявещество, экстрагированное из другой фазы.

Реэкстракция - процесс извлечения яда из экстракта.

Промывка - процесс удаления примесей из отдельной фазы, содержащей основное вещество (т.е. из экстракта или реэкстракта).

Очистка вымораживанием. Путём охлаждения удаляют из экстрактов жиры, липиды и некоторые пигменты. Для этого используют смесь полярных растворителей (спирт, ацетон) с добавлением воды (от 5 до 50%). Экстракт в этой фазе охлаждают в испарительной камере холодильника, при температуре от -5°С до -20°С. Жиры при охлаждении переходят в твердое состояние.

Очистка осаждением. Некоторые коэкстрактивные вещества можно выделить из раствора с помощью добавления специальных реагентов. Особенно эффективен этот способ в сочетании с охлаждением анализируемого экстракта.

Для осаждения коэкстрактивных веществ из экстрактов используют и другие реагенты (аммония молибдат, трихлоруксусную кислоту и др.).

Очистка на хроматографических колонках. Этот способ основан на хроматографическом принципе разделения веществ. Обычно для этих целей используют жидкостную хроматографию на колонке. При этом используют стеклянные колонки диаметром 1-3 см и длиной до 30 см. В качестве адсорбентов используют окись алюминия, силикагель, активированный уголь и др. Сконцентрированный экстракт заливают в подготовленную колонку и элюируют препарат органическим растворителем (или смесью растворителей).

МЕТОДЫ АНАЛИЗА НЕКОТОРЫХ ЯДОВИТИХ ВЕЩЕСТВ.

Вопросы для самостоятельной подготовки:

Биологические методы.

Биохимические методы.

Физико-химические методы.

Способы идентификации токсических веществ

1. Биологические методы

Биологические методы основаны на различной чувствительности биологических тест-объектов к ядам. При использовании биологического метода существенное значение имеет выбор тест — объекта и способа введения исследуемых веществ.

Биопроба на животных. Как правило, токсикологические исследования проводят на наиболее чувствительных видах животных. Обычно для этих целей используют белых мышей, кошек, крыс, кроликов, собак. Мыши, например, примерно в 10 раз чувствительнее к зарину, чем собаки, кошки весьма чувствительны к ФОС. При определении подходящих видов животных для биопробы учитывается их масса, количество имеющегося патологического материала и другие факторы.

Способы определения наличия токсических веществ в корме путём биопробы на животных:

- скармливание исследуемого продукта животным;

- введение экстракта, полученного из патологического материала или образцов корма, через зонд в желудок;

- парентеральное введение животным экстрактов из исследуемых продуктов;

- нанесение экстракта на кожу животным.

Для биопробы подбирают только клинически здоровых животных. В процессе опыта проводятся клинические наблюдения, а при необходимости — биохимические, физиологические и морфологические исследования.

Результаты биопробы определяются по изменению соответствующих показателей клинического статуса животных, физиологических или биохимических показателей.

Алиментарная проба на животных.

К некоторым видам токсических веществ проявляют повышенную чувствительность многие виды лабораторных и сельскохозяйственных животных. Однако, на практике для биопробы используют животных с небольшой массой тела: белые мыши, морские свинки, кролики, кошки, цыплята, голуби, утята. Алиментарная проба используется, например, для определения токсических веществ, вырабатываемых микроскопическими грибами.

При постановке биопробы подозрительный корм скармливают животным на протяжении нескольких дней (до 10 суток). Одновременно с подопытной группой, в обязательном порядке, содержат контрольную группу животных, которым скармливают доброкачественныйкорм. Скармливание токсического корма вызывает гибель животных с клиническими признаками, характерными для той или иной группы яда. Показателями токсичности испытуемого корма, кроме гибели животных, считается: потеря массы тела, расстройство функции желудочно-кишечного тракта, центральной нервной системы; у птиц — цианоз гребня и серёжек, анемия. Резко токсичные образцы корма могут вызвать гибель животных без характерныхклинических симптомов интоксикации.

Токсичность жмыхов, шротов, кормов животного происхождения определяют путём введения в желудок белым мышам (цыплятам и др. животным) водных взвесей и вытяжек из соответствующих кормов. Сухой остаток, после удаления органического растворителя, растворяют в воде или другом инертном растворителе (часто подсолнечное масло). Максимальное количество взвеси, вводимой белым крысам — 0,5, иногда — 2,0 мл. Взвесь вводят через специальный зонд. Этим способом можно определять токсичность и других кормов, а также извлечений из них. Токсичность корма также определяет по времени гибели подопытных животных, степени проявления клинических симптомов интоксикации. При оценке результата обязательно учитывают объём (массу) взятого на анализ образца корма и относительное количество вытяжки, введенное подопытному животному.

Наиболее распространённым является следующий способ постановки биопробы на белых мышах. Навеску измельчённой пробы корма массой 200 г помещают в колбу с притёртой пробкой и заливают 400 мл ацетона. Экстракцию токсических компонентов проводят в аппарате для встряхивания в течение 2 часов или при периодическом перемешивании в течение 20 часов. Экстракт отфильтровывают через бумажный фильтр. Остаток корма в колбе промывают 100 мл ацетона, который отфильтровывают и объединяют с первичным экстрактом. Растворитель удаляют в вакуумном ротационном испарителе или на водяной бане при температуре 45-50°С до объёма 40-50 мл. К экстракту добавляют 4 мл подсолнечного масла и продолжают упаривать ацетон до удаления запаха растворителя (ацетона).

Для опыта берут 5 белых мышей массой по 18 — 20 г и выдерживают их без корма 4-5 часов. После этого, с помощью шприца-зонда, в желудок каждой мыши вводят по 0,5 мл масляного раствора экстракта. За мышами ведут наблюдение в течение 5 суток с момента введения экстракта. В период опыта мышей содержат на обычном рационе. Одновременно с этим, 5 контрольным мышам вводят чистое подсолнечное масло. За мышами ведут ежедневное клиническое наблюдение, определяют их массу тела.

В конце опыта, если через 5 суток не было гибели животных, их усыпляют эфиром. Вскрывают как павших животных (в день гибели), так и убитых.

Определяют 3 степени токсичности корма:

Корм не токсичный: все мыши живы, клинических признаков токсикоза не наблюдается, на вскрытии убитых мышей патологоанатомических изменений не обнаруживается.

Корм слаботоксичный: все мыши живы. Наблюдаются клинические признаки токсикоза: расстройство желудочно-кишечного тракта (понос или запор), нарушение функции центральной нервной системы (угнетение, малоподвижность, возбуждение, дрожь, нарушение координации движений). На вскрытии — геморрагическое воспаление желудочно-кишечного тракта.

Корм токсичный: Наблюдается гибель мышей, потеря живой массы, расстройство функции желудочно-кишечного тракта и центральной нервной системы. На вскрытии обнаруживается геморрагическое воспаление желудочно-кишечного тракта, дистрофические изменения печени, почек, кровоизлияния в паренхиматозных органах.

Данный метод даёт возможность сделать общее заключение о токсичности той или иной партии корма, однако это не исключает необходимости проведения дальнейших исследований с целью качественной и количественной идентификации токсического начала.

Кожная проба на кролике.

Этот способ используется для определения токсичности зернофуража, комбикормов и других продуктов. В течение длительного периода времени кожная проба относилась к стандартным методам определения токсичности кормов. Для выполнения этой пробы отбирают обычно 50 г корма и экстрагируют его органическим растворителем. Органический растворитель отделяют в выпаривательную чашку и удаляют до получения сухого остатка. Сухой остаток растворяют в нескольких каплях подсолнечного масла или рыбьего жира.

В качестве подопытных животных используют кроликов с массой тела до 2,5 — 3,0 кг и непигментированной кожей. За несколько часов до постановки биопробы у кроликов выстригают на боках участки шерсти (3 на 6 см). На оголенную неповреждённую поверхность кожи кролика наносят полученный экстракт и слегка втирают его стеклянной палочкой. Экстракт наносят дважды с интервалом 24 часа. Для предотвращения слизывания экстракта на шею кролика надевают предохранительный воротник (кожа, резина, фанера). Реакцию учитывают ежедневно. При нанесении токсического вещества воспалительный процесс начинает развиваться уже на вторые сутки и усиливаться на 4-5 сутки. Эти сроки могут изменяться в зависимости от дерматотоксических свойств ядовитого вещества и некоторых других моментов. При учёте реакции на коже кролика определяют глубину и характер поражения кожи.

Различают четыре степени интенсивности воспалительной реакции:

Первая - покраснение, повышенная чувствительность кожи, шелушение. Симптомы исчезают через 1-2 дня после нанесения экстракта. Корм слабо токсичный.

Вторая - покраснение, болезненность, незначительное утолщение кожи, мелкие, одиночные желтоватые пузырьки. Затем на их месте возникают корочки подсохшего экссудата, шелушение. Корм слабо токсичный.



Страницы: Первая | 1 | 2 | 3 | ... | Вперед → | Последняя | Весь текст