практические навыки фз

Экспериментальные методы исследования биоэлектрических явлений. Опыт Гальвани.

а). Первый опыт Гальвани (сокращение с металлом, 1786). Нервно-мышечный препарат лягушки укладывают на препаровальный столик и прикасаются к нерву гальваническим пинцетом, одна бранша которого цинковая, а другая — медная. Наблюдают возникающее при этом сокращение.

б). Второй опыт Гальвани (сокращение без металла 1794). Приготовить препарат задней лапки лягушки и тщательно отпрепарировать седалищный нерв от позвоночника до коленного сустава. Затем пересечь мышцы бедра в нижней трети и стеклянным крючком быстро набросить нерв на мышцы так, чтобы он одновременно коснулся поврежденной и неповрежденной поверхности. Мышцы голени при этом сокращаются. Опыт получается том случае, если нерв сохранил высокую возбудимость, а мышцы бедра только что пересечены.

Выработка условного мигательного рефлекса на звонок.

Испытуемый и экспериментатор садятся друг напротив друга у стола. На испытуемого надевают очковую оправу с укрепленной на нее грушей для подачи воздуха. Нажимать на грушу следует слегка, чтобы струя воздуха не вызывала болевых ощущений. Включают на несколько секунд звонок и убеждаются, что звук мигания не вызывает.

Приступают к выработке условного мигательного рефлекса на звонок:

а)включают звонок и тотчас же нажимают на грушу, подавая струювоздуха. Такое сочетание повторяют 5-6 раз, с интервалом не менее 1 мин.

б)после этого включают звонок, не присоединяя к нему подачу воздуха инаблюдают мигательный рефлекс без раздражения роговиц и склеры.

Подсчет эритроцитов камерным методом.

В пробирку точно отмеряют 4 мл 3% р-ра NaСl. Кровь для анализа забирают из пальца левой руки, предварительно обработанного спиртом. Укол нужно делать сбоку пальца, где капиллярная сеть гуще, на глубину 3 мм. Забор крови осуществляется капиллярной пипеткой Сали, промытой 3% раствором NаСl. Кровь взять до круговой отметки капилляра (0,02 мл) и осторожно продуть в пробирку с разводящей жидкостью, промывая последней пипетку. Пробирку закрыть большим пальцем и перевернуть, перемешивая таким образом содержимое пробирки. Получили разведение крови 1:200. Подсчет эритроцитов ведется в счетной камере Горяева. Перед заполнением камеры необходимо ее и покровное стекло притереть к камере так, чтобы появились радужные кольца по краям покровного стекла.

Разбавленную кровь встряхнуть несколько раз. Концом стеклянной

палочки взять из пробирки взвешенную каплю крови и опустить у края

покровного стекла со стороны счетной камеры. После заполнения

оставить камеру в покое на 1 минуту для оседания эритроцитов.

Эритроциты считать под большим увеличением в 5 больших квадратах, разделенных на 16 малых (5×16) = 80, расположенных по диагонали. Счету подлежат те эритроциты, которые находятся внутри квадрата и на верхней и на левой его границах. Результаты подсчета заносят в тетрадь на предварительно начерченную сетку. Вычисление количества форменных элементов в 1 мм кубическом производят по следующей формуле:

Х= А х 4000 х Б

С

Где х — кол-во эритроцитов в 1 мм кубическом,

А — кол-во эритроцитов в 80 малых квадратах,

Б — степень разведения (200),

С — кол-во малых квадратов (80), 1/4000 — объем малого квадрата.

Чтобы получить количество эритроцитов в 1 литре нужно полученную цифру умножить на 1 000 000 (1 мм3 = 1 мкл., в 1 л — 10 000 000 мкл).

Подсчет лейкоцитов камерным методом.

В центрифужную пробирку отмеривают пипеткой 0,4 мл 3% раствора уксусной кислоты. Затем капиллярной пипеткой Сали набирают 0,02 мл крови из пальца удаляя излишек крови касанием кончика пипетки о тугой ватный тампон. Кровь осторожно выдувают в приготовленный раствор и тщательно перемешивают. В этом случае кровь будет разведена в 20 раз. Лейкоциты считают в 100 больших не разлинованных квадратах камеры Горяева, что соответствует 100×16 = 1600 малым. Вычисление количества форменных элементов крови производят по следующей формуле:

Х = А x 4000 x 20 / 1600

Где:

X — кол-во лейкоцитов в 1 мм3,

А — кол-во лейкоцитов, сосчитанных в 100 больших квадратах. Таким образом, для получения результата достаточно практически умножить количество сосчитанных лейкоцитов на 50. В пересчете на литр крови общее число лейкоцитов составляет 5×109 (5х109/л).

Определение количества гемоглобина и цветового показателя

Гемометр Сали представляет собой стойку с тремя гнездами, в два крайних гнезда вставлены запаянные пробирки со стандартной цветной жидкостью, в среднее гнездо вставлена градуированная пробирка для испытуемой крови. Цифры деления шкалы выражают количество НВ и %. К гемометру прилагается капиллярная система на 0,02 мл крови, пипетка для воды, стеклянная палочка.

Градуированная пробирка заполняется до нижней кольцевой отметки 0,2 н раствором НС1. В капиллярную пипетку набирают 0,02 мл крови из пальца. Кончик пипетки опускают на дно пробирки с раствором НС1 и выдуваем кровь так, чтобы верхний слой НС1 остался неокрашенным. Не вынимая пипетки споласкивают ее соляной кислотой. Содержимое перемешать и оставить стоять на 5-6 мин, пока идет образование соляно — кислого гематина. Затем к раствору добавляют по каплям дист, воду до тех пор, пока цвет испытуемого раствора не совпадает со стандартным. Цифра, стоящая на уровне полученного раствора показывает содержание НВ в испытуемой крови.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЦВЕТОВОГО ПОКАЗАТЕЛЯ

Соотношение между количеством НВ и числом эритроцитов носит название цветового показателя. Он позволяет оценить степень насыщения эритроцитов гемоглобином. Высчитывают его по формуле:

Ц.П.= Найденное кол-во НВ х Нормальное число эритроцитов Нормальное кол-во Нв х Найденное число эритроцитов

Упрощенный метод:

Формула определенияЦ.П. = Кол-во НВ г% х 3

АВС

АВС -первые три цифры числа эритроцитов (например 4,2×1012 => 420). В норме Ц.П. колеблется от 0,85 до 1,1. Если Ц.П. выше 1,1 гиперхромия, ниже 0,8 — гипохромия.

Определение СОЭ

При стоянии стабилизированной крови эритроциты в силу своей тяжести оседают. При некоторых физиологических состояниях и при целом ряде заболеваний оседание эритроцитов бывает значительно ускоренным.

Для определения скорости оседания эритроцитов (СОЭ) применяется прибор Панченкова, состоящий из штатива, в котором могут быть фиксированы в вертикальном положении специальные капилляры, градуированные в мм. Метка 0 стоит на расстоянии 100 мм от конца. На этом же уровне находится метка К.

Капилляр промывают раствором цитрата натрия, затем набирают 25 мм этого раствора и выдувают в пробирку. В тот же капилляр набирают кровь до метки К и выдувают в приготовленную пробирку с цитратом натрия. Хорошо смешивают, насасывают в капилляр до метки К-О, ставят в штатив и засекают время. Полученное соотношение крови и цитрата натрия 1:4.

Через час отсчитывают по делениям на капиллярной пипетке величину отстоявшегося столбика плазмы.

В норме скорость оседания эритроцитов равна:

у женщин – 8-15 мм/ч

у мужчин – 6-12 мм/ч

у новорожденных — до 2 мм/час.

Определение групповой принадлежности крови по системе АВ0. Реакция на индивидуальную совместимость, биологическая проба при переливании крови

МЕТОД СЫВОРОТОК

На планшет для определения группы крови в 4 углубления нанести по капле сыворотки I, II, III, IV групп крови. Делают прокол пальца и стеклянной палочкой в каждую каплю сыворотки вносят небольшую каплю крови, каждый раз, тщательно протирая палочку. Крови должно быть в 3-4 раза меньше, чем сыворотки.

Кровь и сыворотку размешивают до равномерного окрашивания смеси. Через 5-7 минут при наличии агглютинации капля становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в комочки и крупинки.

В зависимости от того, с какими сыворотками агглютинирует кровь, различают группы крови:

I- агглютинация отсутствует,

II — агглютинация происходит с сыворотками из I и III групп,

III-агглютинация происходи с сыворотками из I и II групп,

IV-агглютинация происходит с сыворотками из I, II и III групп.

МЕТОД ЦОЛИКЛОНОВ

В настоящее время для определения групп крови пользуются моноклональными антителами против агглютиногенов А и В, получивших название цоликлоны. Обычно раствор цоликлонов анти-А окрашен в розовый цвет, а анти-В в голубой. Порядок определения группы крови тот же, как и при методе сывороток, только при проведении анализа растворы цоликлонов добавляются в две лунки. Результаты считывают в течение 3-х мин.

При этом если агглютинация не происходит, то группа крови I. Если агглютинация происходит с обеими цоликлонами (анти-А и анти-В), то группа крови IV. Если агглютинация выявляется с моноклональными антителами против агглютиногена А, то это II группа крови. При наличии агглютинации с цоликлоном анит-В группа крови III.

Проба на индивидуальную совместимость

Поместите в лунку планшета каплю цитрата натрия, а в нее внесите по капле крови от 2-х испытуемых. Тщательно перемешайте. При появлении хлопьев говорят об агглютинации и несовместимости образцов крови. В идеале для решения вопроса об индивидуальной совместимости смешиванию на стекле или планшете подвергается сыворотка (источник агглютининов) реципиента и эритроциты (источник агглютиногенов) донора, что отражает правило Ландштейнера.

Биологическая проба

Струйно переливается 10-15 мл крови, затем в течение 3 мин оценивается состояние пациента. В случае отсутствия явлений несовместимости (учащение пульса, дыхания, одышка, гиперемия лица) вновь вводят 10-15 мл крови и снова наблюдают за больным. Такую процедуру повторяют 3 раза. Отсутствие реакции при троекратной проверке дает право продолжать переливание.

Определение времени свертывания крови

Метод Ли-Уайта (время свертывания венозной крови)

Подготавливают водяную баню с температурой 37 град. Цельсия, секундомер. Из вены забирают 1 мл крови, помещают в пробирку, которую устанавливают на водяную баню и включают секундомер. Через 2 минуты, а затем через каждые 30 секунд пробирку наклоняют под углом 45 градусов и наблюдают образование плотного сгустка (кровь не выливается при переворачивании пробирки). Время свертывания регистрируют от момента ее взятия до образования плотного сгустка. В норме 5-10 минут.

Метод Бюркера (свертывание капиллярной крови)

На стекле смешиваются равные по объему капли крови и дистиллированной воды. Включается секундомер и путем помешивания образовавшейся смеси регистрируется образование нитей фибрина.

Определение времени кровотечения по Duke

Определить время и интенсивность кровотечения по Дюку. Обработать палец спиртом или эфиром. Сделать прокол мякоти пальца на глубину 3-3,5мм. Включить секундомер и снимать капли фильтровальной бумагой каждые 30 сек. Секундомер выключается в тот момент, когда на бумаге не останется следа крови. В норме время кровотечения равно 2-4 мин.

Для определения интенсивности кровотечения число капель крови на фильтровальной бумаге делят на время кровотечения. В норме она равна 2-3.

Увеличение времени кровотечения и интенсивности свидетельствует о нарушении сосудисто-тромбоцитарного гемостаза.

Определение осмотической стойкости эритроцитов

Известно, что в гипотонических растворах эритроциты набухают и лопаются, в результате чего гемоглобин выходит в окружающую среду. Это явление называется гемолизом. В крови человека имеются эритроциты, обладающие различной устойчивостью к действию гипотонических растворов. Необходимо определить максимальную концентрацию хлористого натрия, при которой начинается (минимальная осмотическая стойкость) и заканчивается (максимальная осмотическая стойкость) гемолиз. С этой целью из рабочего (1%) раствора хлорида натрия готовится серия разведений по следующей схеме:

Вода (мл)

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,55

0,6

0,62

0,65

0,7

1%р-р NаСl (мл)

0,9

0,3

0,7

0,6

0,5

0,45

0,4

0,38

0,35

0,3

Полученная концентрация

(%)

0,9

0,8

0,7

0,6

0,5

0,45

0,4

0,33

0,35

0,3

В каждую пробирку вносится по капле крови, которую тотчас же перемешивают с раствором и оставляют стоять при комнатной температуре в течение 10 мин. Для здоровых людей верхняя (минимальная) граница осмотической стойкости соответствует 0,42-0,48% NаСl. При этом разрушаются наименее устойчивые к осмотическому давлению эритроциты. Полный же гемолиз (максимальная граница стойкости) происходит при 0,30-0,34% NаСl.

Расшифровка агрегатограммы

Агрегатограмма записывается с помощью прибора, получившего название агрегометр. К сожалению, мы не можем воспользоваться на занятиях этим прибором, ибо у нас он предназначен лишь для научной работы. Принцип записи агрегатограммы основан на изменении оптической плотности плазмы, содержащей тромбоциты, в которую вносится один из агрегирующих агентов (АДФ, адреналин, коллаген, тромбоксан А2, антибиотик ристомицин и др.). При этом регистрируется кривая, схема которой изображена на рисунке. В норме агрегатограмма носит двугорбый характер, хотя в зависимости от дозы агрегирующего агента можно получить и одногорбую прямую, а также агрегацию с последующей дезагрегацией (возвращение кривой к исходной величине) (см. рисунок).

Обычно агрегатограмма включает в себя латентный период АВ (момент внесения агрегирующего агента до начала записи агрегатограммы), величину максимальной амплитуды (МА), угол агрегации, время наступления максимальной агрегации и время дезагрегации (СД), если он наступает.

В норме для первой волны индекс агрегации (процент агрегированных тромбоцитов) равен 25-35%, время агрегации колеблется в пределах 30-35 сек, угол агрегации 60-65 градусов.

Нормы для второй волны агрегации: индекс агрегации — 60-70%, время агрегации — 90-100 сек, угол агрегации — 50-60 градусов.

После помещения индуктора в норме агрегация должна наступать не позднее, чем через 20-30 сек. (АВ). Следует помнить, что цена данного деления на агрегатограмме равна 20 сек (1 см ленты). Как правило, врачу необходимо обнаружить значительные нарушения агрегации. Они могут выражаться в отсутствии агрегации, ее чрезмерно низкой амплитуде, длительном латентном периоде. При повышении агрегационной активности тромбоцитов наступает спонтанная (без внесения индуктор) агрегация.

Тромбоэластограмма Расшифровка

Расшифровка тромбоэластограммы

Тромбоэластограмма позволяет судить не только об общей коагуляционной активности крови, но и об отдельных фазах этого процесса. Кроме того, по максимальной амплитуде ТЭГ можно ориентировочно судить о количестве образующегося фибрина и активности тромбоцитарных факторов. Запись ТЭГ производится с помощью тромбоэластографа. На ТЭГ различают следующие параметры:

R — время реакции. Характеризует I и II фазы свертывания крови. Это время от момента взятия крови до расхождения ветвей ТЭГ. В норме этот показатель равен от 5 до 6 мин.

К- время коагуляции. Характеризует III фазу свертывания крови. Оно

определяется от начала расширения ветвей, т.е. от конца параметра

К до расширения ветвей на 20 мм. В норме этот показатель равен от

3 до 6 мин. Т — константа тотального свертывания крови. Измеряется от начала записи до максимального расширения ветвей ТЭГ. В норме 25-35 мин.

Угол или угловая константа. Образуется касательной от начала записи ТЭГ к одной из ее ветвей. В норме равен 12-25 гр.

МА — максимальная амплитуда. Максимальное расширение ветвей гиперкоагуляции или усиление протекающей ретракции кровяного сгустка. Низкая амплитуда может свидетельствовать о снижении числа тромбоцитов, концентрации фибриногена или повышении уровня естественных антикоагулянтовТромбоэластограмма

Анализ ЭКГ





Расшифровку ЭКГ следует начинать с определения величины контрольного mV (чаще всего 1 mV равен 10 мм). Затем, учитывая величину контрольного mV, определить высоту всех зубцов ЭКГ. Продолжительность зубцов, сегментов, интервалов измерить с помощью вертикальной разлиновки диаграммой ленты. Расстояние между 2 вертикальными линиями соответствует 0,02 с, при скорости записи 50 мм/сек.

Алгоритм расшифровки:

определение водителя ритма. Ритм может быть синусовый (водитель ритма – синусный узел, перед каждым желудочковым комплексом присутствует предсердный или зубец Р) и несинусовый.

правильность ритма. Если продолжительность интервалов RR одинакова, то ритм правильный, если нет – то неправильный (аритмия).

подсчет ЧСС. Частота сердечных сокращений равна отношению продолжительности минуты (60 сек) к продолжительности интервала RR (в сек) при правильном ритме. При аритмиях подсчитывается ЧСС максимальная (при этом анализируется минимальный по продолжительности RR) и ЧСС минимальная (при этом изучается максимальный по продолжительности RR).

определение положения электрической оси сердца. При нормограмме максимальная амплитуда R регистрируется во II стандартном отведении. При левограмме – в I, и, кроме того, сумма амплитуд зубцов R во II и III равна амплитуде R в I, а также III отведении регистрируется «отрицательный» комплекс QRS. При правограмме амплитуда зубца R максимальна в III отведении и равна сумме амплитуд зубцов R во II и III, а также в I стандартном отведении регистрируется «отрицательный» комплекс QRS.

анализ интервалов, зубцов и сегментов.

Нормальная ЭКГ:

ритм синусовый.

ритм правильный.

ЧСС 60-80 в минуту (реже – брадикардия, чаще – тахикардия).

нормограмма (направление электрической оси сверху вниз, справа налево, сзади наперед).

амплитуда зубцов: Р

Подсчет ЧСС по пульсу

Пульс определяется на центральных (например, сонной) и периферических (любых доступных пальпации, но чаще лучевой) артериях. Частота пульса в норме соответствует частоте сердечных сокращений и подсчитывается как число пульсовых волн, пропальпированных за одну минуту. Практически достаточно подсчитать число пульсовых колебаний за 15 секунд и умножить полученный результат на 4.

Прослушивание тонов и клапанов сердца

Точки наилучшего выслушивания (в порядке выслушивания):

V межреберье слева на 1,5 см кнутри от среднеключичной линии – митральный клапан.

II межреберье справа по краю грудины – клапан аорты.

II межреберье слева по краю грудины – клапан легочного ствола.

основание мечевидного отростка грудины – трехстворчатый клапан.

При этом прослушиваются звуковые явления, возникающие при нормальной работе сердца – тоны. В норме у взрослого человека слышны I (систолический) и II (диастолический) тоны сердца. I тон выслушивается на верхушке, II – на основании сердца.

Методы определения артериального давления

Определение давления способом Короткова:

Этим способом можно определить и систолическое и диастолическое давление. Испытуемому на обнаженное плечо накладывают манжету сфигноманометра так, чтобы под ней свободно проходило два пальца. Винтовой клапан на груше плотно перекрывают, чтобы предотвратить утечку воздуха из системы. Находят в локтевом суставе пульсирующую артерию и устанавливают над ней фонендоскоп. Начинают нагнетать воздух в систему до тех пор, пока пульс не исчезнет. Тогда слегка открывают винтовой клапан и выпускают воздух, давая давлению в манжетке постепенно снижаться. Когда давление в манжете станет меньше систолического, появляется пульс. Отмечают давление в манометре в момент появления пульса и считают его соответствующим систолическому, когда звуковые явления исчезают считают — диастолическим.

Определение способом Рива-Роччи:

Определение проводится аналогично, но вместо аускультации проводится пальпация артерии, но достоверно определяется только систолическое АД.

Функциональные пробы ССС

Рефлекс Чермака (синокаротидный рефлекс).

Определить частоту пульса и артериального давления в состоянии покоя. Произвести надавливание на область каротидного синуса (на середине между углом нижней челюсти и верхним краем щитовидного хряща) в течение 30 сек. Пульс подсчитывать через каждые 10 сек, артериальное давление определять через минуту. В норме наблюдаются урежение пульса на 8-12 ударов в минуту.

Рефлекс Данини-Ашнера.

Определить частоту пульса и артериального давления в покое. Произвести надавливание на глазные яблоки в течение 30 сек. На фоне манипуляции и после нее определять пульс через каждые 10 сек, а артериальное давление через минутные интервалы. В норме пульс урежается на 8-12 ударов в минуту.

Клиностатическая проба.

Определить частоту пульса и артериального давления в состоянии покоя. Предложить перейти испытуемому в горизонтальное положение. Пульс подсчитывать через каждые 10 сек, артериальное давление определять через минуту. В норме наблюдаются урежение пульса на 4-6 ударов в минуту.

Ортостатическая проба.

Определить частоту пульса и артериального давления в состоянии покоя в положении лежа (испытуемый должен быть в горизонтальном положении не менее 5 минут). Испытуемый плавно переходит в вертикальное положение. В течение 30 сек у него подсчитывают пульс через каждые 10 сек и определяют артериальное давление. В норме наблюдаются учащение пульса на 4-6 ударов в минуту.

Опыт Станиуса

Обездвижить лягушку путем разрушения спинного мозга, вскрыть грудную клетку, обнажая сердце. Открыв доступ к сердцу, взять на лигатуру уздечку сердца и обе аорты.

Сосчитать число сокращений сердца в минуту и наложить первую лигатуру, отделяя синусный узел от других отделов сердца.

Для этого, приподняв сердце за уздечку возле аорты, делают вокруг венозного синуса петлю и постепенно стягивают ее. Границей синуса служит беловатая линия с дорсальной стороны. Отмечают, как изменяется сокращение синуса предсердий и желудочков.

Для наложения второй лигатуры Станиуса подводят нитку под желудочками, делают петлю и туго стягивают ее строго по атриовентрикулярной линии. Сосчитать число сокращений желудочков.

Наложить третью лигатуру Станиуса на границе нижней и средней трети желудочка. Она лишает связи верхушку сердца с центрами автоматии и доказывает, что верхушка не способна к автоматии. В этом же можно убедиться, если отрезать верхушку: желудочки будут продолжать сокращаться, а верхушка — нет.

Определение жизненной емкости легких. Расшифровка спирограммы

Запись спирограммы производится с помощью спирографа. Испытуемый берет в рот загубник, на нос накладывается специальный мягкий зажим. Убедившись, что испытуемый дышит спокойно, включают лентопротяжный механизм. На ленте записывается кривая — спирограмма. Испытуемый проводит серию спокойных вдохов и выдохов, что дает представление о дыхательном воздухе, затем делает глубокий вдох и выдох, что соответствует величине резервного и дополнительного воздуха.

Расшифровка спирограммы

I. Количество потребленного воздуха определяется высотой зубцов (одно поперечное деление соответствует 200 мл, скорость движения ленты -50 мм/мин).

Определить объем дыхательного воздуха.

Определить объемы дополнительного и резервного воздуха.

Определить жизненную емкость легких по данным спирограммы.

Рассчитать минутный объем легочной вентиляции (дыхательныйобъем х число дыхательных движений в минуту).

5.Определить поглощение О2 за I минуту. Для этого на спирограмме проводим прямую, соединяющую большинство нижних точек кривой. Из верхней точки опускаем перпендикуляр до пересечения с продольной линией спирограммы. Получаем прямоугольный треугольник, где на оси абсцисс отложено время (расстояние между двумя поперечными линиями — 30 сек), на оси ординат — количество поглощенного О2. Количество поглощенного О2 за время работы определяется из расчета 21% его содержания в атмосферном воздухе.

II. Расчет жизненной емкости легких по формуле Болдина-Корнеда: для мужчин: ЖЕЛ = (27,63 — 0,1128 х В) х Р; для женщин: ЖЕЛ = (21,78 — 0,1018 х В) х Р, где В — возраст, Р — рост.

Определение основного обмена



Страницы: Первая | 1 | 2 | 3 | ... | Вперед → | Последняя | Весь текст